کیت تشخیص فیوژن ژن RET مدل AmoyDx® RET Gene Fusions Detection Kit

کیت تشخیص فیوژن ژن RET یک ابزار مولکولی مبتنی بر Reverse Transcription و Real-Time PCR است که برای شناسایی کیفی فیوژن‌های مشخص RET در RNA استخراج‌شده از نمونه‌های بافت توموری FFPE طراحی شده است. مدل AmoyDx® RET Gene Fusions Detection Kit امکان بررسی 9 الگوی فیوژن مرتبط با ژن‌های شریکی مانند KIF5B، CCDC6 و NCOA4 را فراهم می‌کند و به‌ویژه برای مطالعات مولکولی نمونه‌های مرتبط با سرطان ریه سلول غیرکوچک مورد توجه قرار می‌گیرد.

در این روش ابتدا RNA استخراج‌شده طی فرآیند Reverse Transcription به cDNA تبدیل می‌شود و سپس اهداف ژنتیکی موردنظر با Real-Time PCR مورد بررسی قرار می‌گیرند. وجود کنترل داخلی نیز به ارزیابی اعتبار واکنش کمک می‌کند. این محصول با کد 8.01.0063 و در نسخه Research Use Only عرضه می‌شود؛ بنابراین کاربرد آن باید متناسب با وضعیت پژوهشی محصول و دستورالعمل رسمی سازنده در نظر گرفته شود.

کیت تشخیص فیوژن ژن RET چیست و چه کاربردی دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای بررسی تغییرات مولکولی حاصل از اتصال RET به ژن‌های شریک مشخص طراحی شده است. این تغییرات می‌توانند باعث تشکیل رونوشت‌های فیوژن شوند که در برخی تومورها مورد مطالعه قرار می‌گیرند. مدل AmoyDx از یک روش هدفمند استفاده می‌کند؛ یعنی به‌جای بررسی گسترده تمام تغییرات ژنتیکی احتمالی، مجموعه مشخصی از Fusion Variantها را هدف قرار می‌دهد. این ویژگی امکان بررسی متمرکز وضعیت فیوژن‌های تحت پوشش پنل را در RNA استخراج‌شده از بافت FFPE فراهم می‌کند. از کاربردهای مهم این محصول می‌توان به مطالعات مولکولی تومور، تحقیقات مرتبط با NSCLC و بررسی نمونه‌هایی اشاره کرد که پژوهشگر قصد دارد وجود فیوژن‌های تعریف‌شده RET را در آنها ارزیابی کند.

فیوژن ژن RET چیست و چگونه ایجاد می‌شود؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای شناسایی رونوشت‌هایی به کار می‌رود که در نتیجه اتصال بخش‌هایی از RET به یک ژن شریک ایجاد شده‌اند. Rearrangement ژنومی می‌تواند ساختار طبیعی ژن را تغییر دهد و زمینه تشکیل یک Fusion Gene را فراهم کند. در برخی از این تغییرات، بخش دارای فعالیت تیروزین کینازی RET در ساختار فیوژن حفظ می‌شود و ممکن است مسیرهای پیام‌رسانی سلولی را تحت تأثیر قرار دهد. اهمیت بررسی این تغییرات به نوع تومور و هدف مطالعه بستگی دارد. در آزمون‌های Targeted مانند مدل AmoyDx تنها فیوژن‌هایی قابل شناسایی هستند که توالی‌های مربوط به آنها از قبل در طراحی پنل آزمایش لحاظ شده باشد.

فیوژن RET چه ارتباطی با سرطان ریه NSCLC دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET می‌تواند برای مطالعات مولکولی مرتبط با نمونه‌های سرطان ریه سلول غیرکوچک مورد استفاده قرار گیرد. RET Fusion در زیرگروهی از NSCLC به‌عنوان یک تغییر مولکولی قابل بررسی شناخته می‌شود و به همین دلیل تعیین وضعیت این ژن در مطالعات سرطان ریه اهمیت پیدا کرده است. محصول AmoyDx مورد بحث برای RNA استخراج‌شده از نمونه بافت توموری FFPE طراحی شده و اهداف از پیش تعیین‌شده‌ای را بررسی می‌کند. با توجه به RUO بودن این نسخه، کاربرد محصول باید در چارچوب پژوهشی تعریف شود و نتایج آن نباید خارج از محدوده تعیین‌شده توسط سازنده به کاربرد تشخیصی یا تصمیم‌گیری درمانی تعمیم داده شوند.

تفاوت RET Fusion با RET Mutation چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای بررسی Fusion طراحی شده است و نباید عملکرد آن با آزمون‌های شناسایی Mutation یکسان در نظر گرفته شود. در Gene Fusion، بخش‌هایی از دو ژن در نتیجه یک تغییر ساختاری به یکدیگر متصل می‌شوند و رونوشت جدیدی ایجاد می‌کنند؛ درحالی‌که Mutation می‌تواند شامل تغییر در توالی نوکلئوتیدی ژن باشد. بنابراین یک نتیجه منفی در آزمایش Fusion به معنی نبود تمام تغییرات احتمالی RET نیست. برای بررسی سایر Alterationهای این ژن باید از آزمونی استفاده شود که مشخصاً برای همان نوع تغییر طراحی و اعتبارسنجی شده باشد. توجه به این تفاوت هنگام انتخاب کیت مولکولی اهمیت زیادی دارد.

کیت AmoyDx RET چه فیوژن‌هایی را شناسایی می‌کند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای شناسایی کیفی 9 الگوی فیوژن از پیش تعریف‌شده طراحی شده است. اهداف تحت پوشش این پنل با ژن‌های شریک شناخته‌شده‌ای مانند KIF5B، CCDC6 و NCOA4 ارتباط دارند. نکته مهم این است که عبارت «9 فیوژن» نباید به معنی شناسایی تمام rearrangementها یا تمام شرکای احتمالی RET تفسیر شود. این محصول یک Targeted Assay است و تنها اهدافی را بررسی می‌کند که در طراحی مولکولی آن گنجانده شده‌اند. به همین دلیل هنگام استفاده از محصول باید دامنه تشخیص براساس IFU همان نسخه بررسی شود. این موضوع به‌خصوص در تفسیر نتیجه منفی اهمیت دارد، زیرا نبود سیگنال فقط درباره اهداف تحت پوشش آزمون اطلاعات ارائه می‌کند.

فیوژن KIF5B-RET چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET امکان بررسی Variantهای تعریف‌شده مرتبط با KIF5B-RET را فراهم می‌کند. KIF5B یکی از شناخته‌شده‌ترین Fusion Partnerهای RET در مطالعات مولکولی سرطان ریه است. در این تغییر ساختاری، بخش‌هایی از KIF5B و RET در کنار یکدیگر قرار می‌گیرند و رونوشت فیوژن ایجاد می‌شود. آزمون‌های هدفمند می‌توانند با طراحی پرایمرها و پروب‌های اختصاصی، توالی‌های مربوط به Variantهای تعیین‌شده این فیوژن را مورد بررسی قرار دهند. بااین‌حال، قابلیت شناسایی هر Variant به محدوده طراحی assay بستگی دارد؛ بنابراین نباید تشخیص KIF5B-RET را به تمام Breakpointهای احتمالی این فیوژن تعمیم داد.

فیوژن CCDC6-RET چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET علاوه بر اهداف مرتبط با KIF5B، برای بررسی فیوژن‌های تعریف‌شده مرتبط با CCDC6 نیز طراحی شده است. CCDC6 از دیگر ژن‌های شریک شناخته‌شده RET محسوب می‌شود و اتصال آن به RET می‌تواند یک Fusion Transcript ایجاد کند. در روش مبتنی بر RNA، وجود رونوشت هدف با استفاده از توالی‌های اختصاصی مورد بررسی قرار می‌گیرد. تشخیص موفق به کیفیت RNA، وجود Variant تحت پوشش پنل و عملکرد صحیح مراحل Reverse Transcription و PCR وابسته است. بنابراین نتیجه آزمایش باید در محدوده فنی همان کیت تفسیر شود و وجود سایر rearrangementهای خارج از طراحی آزمون را نمی‌توان تنها بر اساس این نتیجه ارزیابی کرد.

فیوژن NCOA4-RET چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برخی الگوهای تعریف‌شده مرتبط با NCOA4-RET را نیز در مجموعه اهداف خود پوشش می‌دهد. NCOA4 یکی از Fusion Partnerهایی است که اتصال آن به RET در مطالعات مولکولی گزارش شده و می‌تواند با روش‌های هدفمند مورد بررسی قرار گیرد. در آزمون AmoyDx، شناسایی بر پایه RNA و تشکیل cDNA انجام می‌شود؛ بنابراین وجود رونوشت مناسب برای آشکارسازی هدف اهمیت دارد. همانند سایر فیوژن‌های این پنل، مثبت شدن نتیجه بیانگر شناسایی هدف موردنظر در محدوده عملکرد assay است و نتیجه منفی نیز نباید به معنی رد تمام تغییرات ساختاری احتمالی مربوط به RET در نمونه در نظر گرفته شود.

کیت AmoyDx RET Gene Fusions Detection Kit چگونه کار می‌کند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET فرآیند شناسایی را از RNA نمونه آغاز می‌کند. ابتدا RNA با کیفیت مناسب از بافت FFPE استخراج می‌شود و سپس طی مرحله Reverse Transcription، مولکول‌های RNA هدف به cDNA تبدیل می‌شوند. cDNA حاصل به‌عنوان قالب مرحله Real-Time PCR مورد استفاده قرار می‌گیرد. در این مرحله پرایمرهای اختصاصی به توالی‌های هدف متصل شده و در صورت وجود Fusion Transcript موردنظر، تکثیر صورت می‌گیرد. سیستم آشکارسازی فلورسنت نیز امکان پایش سیگنال مرتبط با اهداف را فراهم می‌کند. علاوه بر هدف اصلی، کنترل داخلی در واکنش وجود دارد تا بتوان عملکرد فرآیند و کیفیت قابل قبول نمونه را براساس معیارهای تعیین‌شده در IFU ارزیابی کرد.

مرحله Reverse Transcription چه نقشی در تشخیص RET Fusion دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET از RNA به‌عنوان ماده ژنتیکی اولیه استفاده می‌کند؛ در نتیجه پیش از PCR باید RNA به قالب مناسب تبدیل شود. آنزیم Reverse Transcriptase طی مرحله رونویسی معکوس، RNA را به complementary DNA یا cDNA تبدیل می‌کند. پس از تشکیل cDNA، توالی‌های مربوط به Fusion Transcript می‌توانند در مرحله PCR تکثیر شوند. کیفیت این مرحله اهمیت بالایی دارد، زیرا RNA استخراج‌شده از بافت‌های FFPE ممکن است به علت فیکساسیون، شرایط نگهداری یا کیفیت اولیه نمونه دچار تخریب شده باشد. وجود RNA کافی و مناسب می‌تواند در دستیابی به یک واکنش قابل ارزیابی نقش مهمی داشته باشد.

Real-Time PCR چگونه فیوژن‌های RET را شناسایی می‌کند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET پس از تولید cDNA از سیستم Real-Time PCR برای تکثیر و آشکارسازی اهداف تعیین‌شده استفاده می‌کند. پرایمرها به توالی‌های اختصاصی متصل می‌شوند و در صورت حضور هدف، فرآیند تکثیر آغاز می‌شود. همزمان، پروب‌های فلورسنت امکان مشاهده سیگنال مربوط به محصول PCR را فراهم می‌کنند. افزایش سیگنال طی چرخه‌های واکنش توسط دستگاه Real-Time PCR ثبت شده و سپس نتیجه مطابق معیارهای تعریف‌شده سازنده ارزیابی می‌شود. استفاده از این فناوری امکان بررسی هدف بدون نیاز به مشاهده محصولات PCR با روش‌های سنتی پس از پایان واکنش را فراهم می‌کند، اما تفسیر Cut-off و سیگنال‌ها باید دقیقاً مطابق IFU انجام شود.

کنترل داخلی کیت چه نقشی در اعتبار نتیجه دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET علاوه بر اهداف مربوط به Fusion، از یک سیستم کنترل داخلی برای بررسی مناسب بودن فرآیند آزمایش استفاده می‌کند. سیگنال کنترل می‌تواند اطلاعاتی درباره کفایت ماده ژنتیکی و عملکرد صحیح بخش‌هایی از واکنش ارائه دهد. اگر کنترل داخلی معیارهای تعریف‌شده را برآورده نکند، نتیجه مربوط به هدف اصلی ممکن است قابل تفسیر نباشد و بررسی مجدد نمونه یا واکنش ضرورت پیدا کند. وجود این کنترل به‌خصوص برای نمونه‌های FFPE اهمیت دارد، زیرا کیفیت RNA آنها می‌تواند متغیر باشد. معیار دقیق پذیرش یا رد کنترل باید براساس دستورالعمل رسمی نسخه مورد استفاده تعیین شود.

چرا کیفیت RNA در تشخیص فیوژن RET اهمیت دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای بررسی Fusion Transcript به RNA قابل استفاده نیاز دارد و به همین دلیل کیفیت استخراج یکی از مراحل مهم پیش‌تحلیلی محسوب می‌شود. نمونه‌های FFPE تحت فرآیند فیکساسیون با فرمالین و پارافینه شدن قرار می‌گیرند و این شرایط می‌تواند باعث Fragmentation یا کاهش کیفیت RNA شود. مدت فیکساسیون، سن بلوک بافتی، مقدار بافت توموری، روش استخراج و شرایط نگهداری نمونه همگی می‌توانند بر RNA حاصل تأثیر بگذارند. استفاده از نمونه نامناسب ممکن است کیفیت واکنش را کاهش دهد یا موجب نامعتبر شدن نتیجه شود. بنابراین ارزیابی نمونه و رعایت دستورالعمل استخراج RNA پیش از ورود به مرحله RT-PCR اهمیت زیادی دارد.

آیا نمونه FFPE برای بررسی RET Fusion مناسب است؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای استفاده از RNA استخراج‌شده از نمونه‌های بافت توموری FFPE طراحی شده است. این نمونه‌ها به دلیل کاربرد گسترده در پاتولوژی، منبع مهمی برای مطالعات مولکولی محسوب می‌شوند؛ اما کیفیت ماده ژنتیکی آنها می‌تواند تحت تأثیر مراحل آماده‌سازی قرار گیرد. فیکساسیون بیش‌ازحد، نگهداری طولانی یا مقدار ناکافی بافت ممکن است RNA قابل استفاده را کاهش دهد. به همین دلیل، صرف FFPE بودن نمونه برای مناسب بودن آن کافی نیست و کیفیت RNA استخراج‌شده نیز باید مورد توجه قرار گیرد. رعایت معیارهای نمونه و استخراج تعیین‌شده توسط سازنده برای دستیابی به نتیجه قابل ارزیابی ضروری است.

چه عواملی می‌توانند بر نتیجه آزمایش RET Fusion تأثیر بگذارند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET مانند سایر آزمون‌های مولکولی تحت تأثیر عوامل پیش‌تحلیلی و تحلیلی قرار می‌گیرد. کیفیت پایین RNA، مقدار ناکافی نمونه، وجود مواد مهارکننده PCR، خطا در آماده‌سازی Reagentها و رعایت نکردن شرایط حرارتی می‌توانند بر عملکرد واکنش اثر بگذارند. از سوی دیگر، اگر Fusion Variant موجود در نمونه خارج از محدوده اهداف پنل باشد، انتظار شناسایی آن توسط یک آزمون Targeted وجود ندارد. به همین دلیل، کنترل کیفیت نمونه، اجرای صحیح پروتکل، بررسی کنترل‌های واکنش و آگاهی از محدوده تشخیصی محصول باید همزمان در نظر گرفته شوند.

تفاوت Real-Time PCR و NGS در بررسی فیوژن RET چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET مبتنی بر Real-Time PCR یک روش Targeted محسوب می‌شود و برای بررسی مجموعه‌ای از اهداف از پیش تعیین‌شده مناسب است. در مقابل، روش‌های NGS بسته به طراحی پنل می‌توانند محدوده وسیع‌تری از تغییرات ژنتیکی یا Fusion Partnerها را بررسی کنند. روش هدفمند PCR معمولاً زمانی کاربرد دارد که اهداف مشخصی مدنظر باشند، درحالی‌که NGS می‌تواند برای بررسی جامع‌تر مولکولی مورد استفاده قرار گیرد. هیچ‌یک از این فناوری‌ها را نمی‌توان صرفاً براساس نام روش در تمام شرایط برتر دانست؛ انتخاب روش مناسب به هدف مطالعه، تعداد ژن‌های مورد بررسی، نوع نمونه، تجهیزات آزمایشگاه و گستردگی اطلاعات موردنیاز بستگی دارد.

آیا Real-Time PCR تمام فیوژن‌های RET را شناسایی می‌کند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET تنها اهدافی را می‌تواند شناسایی کند که در طراحی مولکولی همان assay تعریف شده باشند. بنابراین Real-Time PCR به خودی خود به معنی قابلیت تشخیص تمام Fusion Variantهای یک ژن نیست. اگر پرایمر و پروب لازم برای یک فیوژن یا Breakpoint خاص در پنل وجود نداشته باشد، آن تغییر خارج از محدوده تشخیصی آزمون قرار خواهد گرفت. این موضوع یکی از تفاوت‌های مهم آزمون‌های Targeted با برخی پنل‌های گسترده‌تر مولکولی است. در نتیجه هنگام انتخاب کیت باید فهرست دقیق Variantهای قابل شناسایی بررسی شود و نتیجه منفی نیز فقط در همان محدوده تفسیر شود.

چه زمانی بررسی هدفمند RET Fusion کاربرد دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET زمانی می‌تواند برای یک پروژه آزمایشگاهی مناسب باشد که هدف پژوهش، بررسی مجموعه مشخصی از Fusion Variantهای شناخته‌شده باشد. در چنین شرایطی، یک Targeted Assay می‌تواند مسیر مستقیمی برای ارزیابی اهداف تعریف‌شده فراهم کند. اگر هدف پژوهش کشف Fusion Partnerهای ناشناخته یا بررسی همزمان تعداد زیادی ژن و Alteration باشد، ممکن است روش‌های گسترده‌تر مولکولی متناسب‌تر با طراحی مطالعه باشند. انتخاب روش باید پیش از شروع آزمایش و براساس سؤال پژوهشی انجام شود؛ زیرا محدوده اطلاعات حاصل از هر تکنولوژی متفاوت است و نمی‌توان نتایج یک پنل محدود را به تمام تغییرات ژنتیکی RET تعمیم داد.

محدودیت‌های AmoyDx RET Gene Fusions Detection Kit چیست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET یک آزمون هدفمند است و مهم‌ترین محدودیت آن به دامنه اهداف تعریف‌شده در پنل مربوط می‌شود. نتیجه منفی به این معنی نیست که هیچ rearrangement یا Fusion دیگری در RET وجود ندارد؛ بلکه تنها نشان می‌دهد اهداف قابل شناسایی توسط assay مطابق معیارهای آن آشکار نشده‌اند. کیفیت RNA استخراج‌شده از FFPE نیز می‌تواند روی عملکرد آزمایش اثر بگذارد. علاوه بر این، نسخه مورد بحث با وضعیت RUO عرضه می‌شود و کاربرد آن باید در محدوده پژوهشی محصول باقی بماند. رعایت پروتکل سازنده، استفاده از دستگاه سازگار و بررسی کنترل‌های آزمایش برای جلوگیری از تفسیر نادرست نتایج ضروری است.

نتیجه مثبت RET Fusion چگونه تفسیر می‌شود؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET در صورت آشکارسازی سیگنال معتبر مربوط به یکی از اهداف پنل و تأیید شرایط کنترل، می‌تواند وجود Fusion Transcript تحت پوشش آزمون را نشان دهد. نوع گزارش نتیجه به طراحی assay و معیارهای موجود در IFU بستگی دارد. مثبت شدن هدف نباید فراتر از محدوده محصول تفسیر شود و در نسخه RUO نیز نتیجه در چارچوب پژوهشی معنا دارد. همچنین وجود یک Fusion Transcript اطلاعات مستقلی درباره سایر Alterationهای ژنتیکی RET ارائه نمی‌دهد. به همین دلیل، تفسیر داده باید با شناخت دقیق اهداف پنل، کیفیت نمونه و هدف مطالعه انجام شود.

نتیجه منفی RET Fusion به چه معناست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET در صورت منفی بودن نتیجه نشان می‌دهد که اهداف تعریف‌شده در محدوده عملکرد assay شناسایی نشده‌اند؛ مشروط بر اینکه کنترل‌های آزمایش معتبر باشند. چنین نتیجه‌ای نمی‌تواند وجود تمام Fusionهای احتمالی RET را رد کند، زیرا ممکن است یک نمونه دارای Variant یا Fusion Partner خارج از محدوده طراحی پنل باشد. مقدار پایین RNA هدف یا مشکلات مربوط به کیفیت نمونه نیز باید مطابق معیارهای سازنده در نظر گرفته شوند. بنابراین در گزارش پژوهشی بهتر است نتیجه منفی با محدوده تشخیصی کیت همراه باشد تا از برداشت نادرست «نبود کامل تغییرات RET» جلوگیری شود.

هنگام خرید کیت AmoyDx RET Gene Fusions Detection Kit به چه نکاتی توجه کنیم؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET پیش از سفارش باید از نظر نوع نمونه، تعداد تست، کد محصول، وضعیت RUO، اهداف تحت پوشش و سازگاری با دستگاه موجود در آزمایشگاه بررسی شود. مدل 8.01.0063 برای بررسی فیوژن‌های مشخص RET عرضه شده است و اطلاعات نسخه و Lot محصول باید با مستندات سازنده تطبیق داده شود. برای آزمایشگاهی که با نمونه FFPE کار می‌کند، امکان استخراج RNA با کیفیت مناسب نیز یکی از الزامات مهم Workflow خواهد بود. همچنین بهتر است پیش از خرید، آخرین IFU محصول دریافت شود تا شرایط نگهداری، دستگاه‌های تأییدشده، پروتکل واکنش و معیارهای تفسیر نتایج براساس نسخه واقعی کیت بررسی شوند.

کیت تشخیص فیوژن ژن RET مدل AmoyDx® RET Gene Fusions Detection Kit

AmoyDx® RET Gene Fusions Detection Kit یک کیت مولکولی مبتنی بر فناوری Real-Time PCR است که برای شناسایی کیفی 9 نوع فیوژن ژن RET در RNA استخراج‌شده از نمونه‌های بافت توموری FFPE طراحی شده است.

این کیت به‌طور ویژه برای بررسی فیوژن‌های ژن RET در نمونه‌های بافتی مرتبط با سرطان ریه سلول غیرکوچک (NSCLC) توسعه یافته و شامل مرحله Reverse Transcription برای تبدیل RNA به cDNA و سپس تکثیر و شناسایی اهداف ژنی با PCR است.

ویژگی‌های محصول

• شناسایی کیفی 9 فیوژن ژن RET
• مبتنی بر فناوری Real-Time PCR
• شامل مرحله Reverse Transcription
• قابل استفاده برای RNA استخراج‌شده از بافت FFPE
• طراحی‌شده برای نمونه‌های NSCLC
• حد تشخیص اعلام‌شده: 25 copies/µL
• دارای کنترل مثبت و ژن مرجع داخلی
• تعداد تست در هر کیت: 12 تست
• وضعیت محصول: RUO – Research Use Only

فیوژن‌های قابل شناسایی

این کیت فیوژن‌های RET مرتبط با ژن‌های شریک زیر را شناسایی می‌کند:

• KIF5B-RET
• CCDC6-RET
• NCOA4-RET

در مجموع، 9 الگوی فیوژن مختلف RET توسط کیت پوشش داده می‌شود.

مشخصات فنی

نام محصول: AmoyDx® RET Gene Fusions Detection Kit
برند: AmoyDx®
شرکت سازنده: Amoy Diagnostics Co., Ltd.
کد محصول: 8.01.0063
ژن هدف: RET
نوع آنالیز: Gene Fusion Detection
تعداد فیوژن‌های قابل شناسایی: 9
روش: Reverse Transcription + Real-Time PCR
نوع نمونه: RNA استخراج‌شده از بافت FFPE
کاربرد نمونه: NSCLC FFPE Tissue
حد تشخیص: 25 copies/µL
تعداد تست: 12 Tests/Kit
وضعیت: RUO – Research Use Only

دستگاه‌های سازگار

این کیت طبق IFU با دستگاه‌های زیر سازگار و اعتبارسنجی شده است:

• Stratagene Mx3000P™
• ABI 7500
• LightCycler 480 II
• Bio-Rad CFX96
• SLAN-96S
• Rotor-Gene Q / 6000 (72 wells)

نحوه عملکرد

آزمایش در دو مرحله اصلی انجام می‌شود:

Reverse Transcription: RNA استخراج‌شده از بافت FFPE به cDNA تبدیل می‌شود.

PCR Amplification: توالی‌های هدف RET توسط پرایمرهای اختصاصی تکثیر شده و محصولات حاصل با پروب‌های فلورسنت شناسایی می‌شوند.

در این سیستم از سیگنال FAM برای شناسایی فیوژن‌های RET و از HEX/VIC برای بررسی ژن مرجع داخلی استفاده می‌شود.

شرایط نگهداری

تمام اجزای کیت باید در دمای 20±5- درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری شوند.

Shelf Life: حدود 12 ماه
حداکثر تعداد چرخه Freeze/Thaw توصیه‌شده: 5 مرتبه

کاربرد

کیت AmoyDx RET Gene Fusions Detection Kit برای مطالعات مولکولی مربوط به شناسایی rearrangement و fusionهای ژن RET در نمونه‌های بافت توموری FFPE توسعه یافته است. فیوژن‌های RET یکی از تغییرات ژنتیکی مورد مطالعه در زیرگروهی از سرطان‌های ریه NSCLC هستند.

وضعیت مصرف

این نسخه از محصول با عنوان Research Use Only (RUO) عرضه شده و طبق IFU برای استفاده در روش‌های تشخیصی بالینی در نظر گرفته نشده است.

بسته‌بندی: 12 تست
کد محصول: 8.01.0063
برند: AmoyDx®

آیا دستگاه Real-Time PCR آزمایشگاه با این کیت سازگار است؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET با مجموعه‌ای از دستگاه‌های Real-Time PCR معرفی شده است، اما صرف داشتن قابلیت Real-Time PCR برای تأیید سازگاری هر دستگاه کافی نیست. مدل دستگاه، کانال‌های فلورسنت، تنظیمات نرم‌افزاری و شرایط Cycling باید با الزامات تعیین‌شده برای محصول تطبیق داشته باشند. دستگاه‌هایی مانند ABI 7500، LightCycler 480 II، Bio-Rad CFX96 و Rotor-Gene Q در اطلاعات این محصول دیده می‌شوند. بااین‌حال، پیش از اجرای آزمایش باید مدل دقیق دستگاه موجود در آزمایشگاه با آخرین نسخه IFU مقایسه شود تا از سازگاری پلتفرم اطمینان حاصل شود.

وضعیت RUO در این محصول به چه معناست؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET با کد مورد بحث به‌عنوان Research Use Only عرضه می‌شود. RUO نشان می‌دهد محصول برای استفاده پژوهشی طراحی شده است و نباید بدون داشتن وضعیت Regulatory مناسب برای تصمیم‌گیری تشخیصی یا درمانی مورد استفاده قرار گیرد. این نکته برای آزمایشگاه‌هایی که قصد خرید کیت دارند اهمیت زیادی دارد، زیرا کاربرد موردنظر باید پیش از سفارش با وضعیت محصول مطابقت داده شود. همچنین ممکن است محصولات یا نسخه‌های متفاوت یک برند وضعیت Regulatory متفاوتی داشته باشند؛ بنابراین بررسی برچسب، کد محصول و IFU همان نسخه‌ای که خریداری می‌شود ضروری است.

سوالات متداول درباره کیت تشخیص فیوژن ژن RET

کیت AmoyDx RET Gene Fusions Detection Kit چند فیوژن را بررسی می‌کند؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای بررسی 9 الگوی فیوژن تعریف‌شده طراحی شده است. این اهداف با Fusion Partnerهایی مانند KIF5B، CCDC6 و NCOA4 ارتباط دارند و دامنه دقیق Variantها باید مطابق IFU محصول بررسی شود.

آیا این کیت برای نمونه FFPE قابل استفاده است؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای RNA استخراج‌شده از نمونه بافت توموری FFPE طراحی شده است. کیفیت RNA استخراج‌شده اهمیت زیادی دارد و نمونه باید معیارهای تعیین‌شده برای انجام آزمایش را داشته باشد.

آیا این کیت تمام تغییرات ژن RET را تشخیص می‌دهد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET یک Targeted Assay است و فقط فیوژن‌های مشخصی را که در طراحی پنل قرار گرفته‌اند بررسی می‌کند. سایر Mutationها یا Fusion Variantهای خارج از محدوده آزمون الزاماً شناسایی نمی‌شوند.

آیا این کیت برای سرطان ریه NSCLC کاربرد دارد؟

کیت تشخیص فیوژن ژن RET برای مطالعات مولکولی مرتبط با نمونه‌های NSCLC قابل استفاده است. با توجه به RUO بودن نسخه موردنظر، کاربرد آن پژوهشی است و باید مطابق دستورالعمل سازنده انجام شود.